测定HP－5毛细色谱柱)

1实验 

1.1材料试剂 

甜蜜素标准溶液ρ=10mg/mL，气相(坛墨质检，色谱GBW(E)082260b)。测定正庚烷，饮料国产色谱纯；亚硝酸钠、中甜硫酸、蜜素氯化钠，气相国产分析纯。色谱 

1.2仪器设备 

7890A安捷伦气相色谱仪(附氢离子火焰检测器，测定HP－5毛细色谱柱)。饮料医用离心机(最高转速4000r/min)；回旋振荡器(振荡频率40～1000rpm)；移液器(量程10～100μL，中甜100～1000μL)；电子天平(最大量程1000g，蜜素最小分度值1mg)；15mL有刻度带盖螺口PP离心管。气相 

1.3样品处理 

称取4.00g试样于15mL离心管中。色谱

1.4标准溶液配制

直接用移液器分别吸取甜蜜素标准溶液ρ=10mg/mL：0、测定0.010、0.025、0.050、0.10、0.25、0.50mL于15mL离心管中，得标准系列：0、0.10、0.25、0.50、1.0、2.5、5.0mg。各加水至4mL。 

1.5测定方法

将准备好的标准系列管和样品管一同放入冰箱冷冻层中冷冻5min后取出。向各管准确加入正庚烷2.00mL，加入亚硝酸钠(50g/L)和硫酸溶液(100g/L)各1.00mL，盖紧离心管盖混匀后再放入冰箱冷冻30min。取出后，加入1g氯化钠，旋紧离心管盖子后横向固定于回旋震荡器上，以290r/min震荡3min后取下，3000r/min离心，取正庚烷层，进样1μL供气相色谱分析。 

1.6仪器条件

色谱柱：HP－5毛细管色谱柱(30m×0.32mm×0.25μm)；程序升温：柱温70℃保持3.5min；进样方式：分流进样，分流比5∶1；柱流速：2.4mL/min；检测器温度：250℃，氢气：30mL/min；空气：300mL/min。 

2结果与讨论 

2.1线性范围和检出限

用改进法处理样品后，以0.1～5.0mg含量标准液的峰面积绘制标准曲线，相关系数r=0.9999，表明呈线性关系。用三倍信噪比计算仪器检出限为0.0159mg。取液体样4g为例，得方法检出限为0.0040g/kg。而用GB/T5009.97－2016国标法处理样品后检测，相关系数r=0.9995，仪器检出限为0.0292mg。取样4g得方法检出限为0.0073g/kg。色谱图和校正曲线对比见图1与图2。

2.2精密度和回收率 

(1)使用改进法与国标法分别重复处理同一样品测定，测定结果见表1。使用Excel表格进行t检验，得p=0.093，P＞0.05表明两组数据差异无统计学意义，改进法和国标法的测定结果相同。

(2)对饮料样品的回收率见表2。

用改进法分别对各种饮料类样品进行加标测定，回收率在92%～105%之间，符合检测要求。

3结论

采用减少处理用样品量的改进法测定样品，与原GB/T5009.97－2016国标法相比，检出限、重复性都得到改善。不但可以减少试剂的使用，降低成本，而且在正庚烷提取的过程中可以同时把30份以上的样品放置于回旋震荡器上震荡提取，大大减少了逐个振摇所需的时间，提高工作效率。同时振摇可以统一样品提取的条件，降低人工操作的误差，从而改善标准曲线的线性，提高样品测定的重复性。降低取样量及试剂量，以小体积振摇，在振摇力度相同的情况下，能使溶液间得到更充分的接触，提高了有机溶剂的提取效率，同样浓度的含量可以得到更大的峰面积，降低检出限，即使取样量减少也能满足检测要求。综上，本改进法既节省试剂耗材，又节省人工时间，同时改善样品测定的重复性、降低检出限，又不需要另外购买昂贵仪器，经济实用，适合基层实验室工作改进。

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